巴氏染色液使用說明

【原理與用途】

本品為染色液，適用于各種脫落細(xì)胞的形態(tài)觀察前的染色（涂片染色）。細(xì)胞中的細(xì)胞核是由酸性物質(zhì)組成，它與堿性染料蘇木素氧化物三氧蘇木紅的親和力較強，而細(xì)胞漿則相反，因含有堿性物質(zhì)而與酸性染料亮綠、俾士麥棕、伊紅Y、橘黃G表現(xiàn)不同的親和力；經(jīng)巴氏染色后，細(xì)胞核被染成紫藍色，細(xì)胞漿、肌纖維、膠元纖維等染成藍綠色、淡藍或淡綠色、粉紅色或桔黃色等不同的顏色。

【使用方法】

1. 將涂片置于95%乙醇中固定15 分鐘以上；

2. 依次浸入80%、50%乙醇中各30 秒，水洗1～2分鐘，甩干；

3. 浸入蘇木精染液中3～5分鐘，水洗1～2分鐘，甩干；

4. 浸入鹽酸酒精分化液中分化數(shù)秒，水洗1～2分鐘，甩干；

5. 浸入返藍液中數(shù)秒，水洗1～2 分鐘，甩干；

6. 置于95%乙醇中漂洗，水洗甩干；

7. 浸入橘黃G染液中染1～3分鐘；95％乙醇、95％乙醇、無水乙醇中漂洗各1次，時間各10～20秒；

8. 浸入EA36染液（或EA50染液）中染色2～5分鐘，95％乙醇、95％乙醇、無水乙醇中漂洗各1次，時間各10～20秒；

9. 浸入浸蠟脫蠟透明液中2分鐘；

10. 中性樹膠封固，鏡檢。

【染色結(jié)果】

上皮細(xì)胞：胞核呈紫藍色，核仁紅色；胞質(zhì)染色隨分化程度和細(xì)胞類型不同可染成藍綠色、粉紅色或桔黃色；紅細(xì)胞：鮮紅色或橙紅色。白細(xì)胞：胞核藍紫色，胞質(zhì)淡藍或淡綠色；粘液：淡藍或粉紅色。

【注意事項】

1. 使用場所應(yīng)通風(fēng)，并遠(yuǎn)離火源；涂片厚薄適宜，固定后方可染色；制片用高于95％以上濃度的乙醇固定后會出現(xiàn)染色過深，應(yīng)用95％乙醇固定；

2. 蘇木精染液上有一層金屬膜，下有結(jié)晶沉淀，使用前應(yīng)用濾紙過濾；蘇木精染液在染夠2000～3000張玻片后應(yīng)更換新的染液；蘇木精的染色時間隨氣溫和染液情況而改變；染液以覆蓋涂片為宜，過少因蒸發(fā)導(dǎo)致染料沉淀；

3. 鹽酸酒精分化的作用為分化掉胞漿上沾上的蘇木素，因此時間不宜長，但如果分化不夠，會造成細(xì)胞核顏色過深或（及）胞漿很難上色；分化后立即用自來水沖洗，不宜久置，否則可使全部顏色消失；

4. 返藍亦稱堿化，返藍時間偏短則著色不充分，影響染色效果，碳酸鋰每缸過500張玻片更新；

5. 橘黃G染色時間不宜過長，否則EA50不易上色；橘黃每缸過1000張玻片更新；

6.  EA50或EA36使用前要充分?jǐn)嚢?，染色過程中提拿、旋轉(zhuǎn)染色架數(shù)次。每缸過1000～1800張玻片后更新；

7. 技術(shù)人員操作要流暢，動作干凈利落，不可把上一缸染色液帶入下一缸，每缸交替時要甩干玻片上殘存液體。

8. 細(xì)胞漿著色不佳應(yīng)考慮的因素

8.1 如果全片內(nèi)胞漿都淡染，則需延長染色時間或更換新液；

8.2 如果胞漿不分色或均為淺紅色，適當(dāng)增加染色時間能夠部分糾正不分色狀況；

8.3 胞漿染成灰色或紫色是由于蘇木素染色時間過長或鹽酸酒精分化不佳，經(jīng)過褪色后重新蘇木素染色可以糾正；

8.4 由于標(biāo)本的不同，同樣配方的EA染液可造成偏藍、偏綠和偏紅，對不同的標(biāo)本應(yīng)使用不同的EA染液，一般認(rèn)為：EA36和EA50較適用于婦科標(biāo)本，而EA65或改良EA較適用于非婦科標(biāo)本；

8.5胞漿不分色的另一重要原因是由于EA染液的pH值不恰當(dāng)所致。如染色為紅色，可加少許磷鎢酸溶液糾正；如染色均為藍色或綠色，可加少許飽和碳酸鋰溶液糾正。對于改良EA染液，每100ml染液加入2ml冰醋酸后染色效果更佳，染液使用更持久。

9. 細(xì)胞核著色不佳應(yīng)考慮的因素

9.1細(xì)胞核著色過淺

鹽酸分化時間過長或蘇木精染色液使用時間過長，需要縮短分化時間或延長堿化時間；蘇木精染色液缸中每日加入少量新鮮蘇木精染液；

9.2細(xì)胞核著色過深

鹽酸溶液濃度不夠，適當(dāng)加入幾滴鹽酸以增加濃度；返藍時間過長，則可縮短返藍時間或用水充分漂洗。