1、呂氏(Loeffler)美藍(lán)染色液
A液：美藍(lán)(Methylene blue) 0.3 克95%酒精 毫升
B液：氫氧化鉀(KOH) 0.01 克蒸餾水 100 毫升分別配制A液和B液，然后混合即成。
2、齊氏(Ziehl)石炭酸復(fù)紅染色液
A液：堿性復(fù)紅(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精 10.O 毫升
B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸餾水 95 毫升
將堿性復(fù)紅溶于95%酒精中，配成A液。將石炭酸溶于蒸餾水中，配成B液。將兩者混合即成。
3、結(jié)晶紫染色液(Huclker改訂)A液：結(jié)晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精 25.0 毫升
B液：草酸銨(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸餾水 100 毫升
將結(jié)晶紫研細(xì)后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。將草酸銨溶于蒸餾水，配成B液。兩液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鑒別染色用)碘 1.0克碘化鉀 2.0克蒸餾水 300毫升
先將碘化鉀溶于少量蒸餾水中，再將碘溶于碘化鉀溶液中，溶時(shí)可稍加熱，最后加足蒸餾水量。
5、番紅染色液(革氏鑒別染色用)番紅O(Safranin O) 2.0克 蒸餾水 100毫升
6、孔雀綠染色液(芽孢染色用)孔雀綠(Malachite green) 5.0克蒸餾水 100毫升先將孔雀綠研細(xì)，加少許95%酒精溶解，再加蒸餾水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸餾水 100毫升福爾馬林(40%甲醛) 0.5毫升將黑素在蒸餾水中煮沸5分鐘，加入福爾馬林作為防腐劑，用玻璃棉過(guò)濾。
8、剛果紅染色液剛果紅(Congo red) 2.0克蒸餾水 100毫升
9、稀釋結(jié)晶紫染液(放線菌染色用)結(jié)晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸餾水 95.0
10、乳酸石碳酸棉藍(lán)染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸 10.0克 甘油 20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升 棉藍(lán) 0.02克蒸餾水 10.0毫升將碳酸加在蒸溜水中加熱溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉藍(lán)，溶解即成。
11動(dòng)物組織石蠟切片染色方法
蘇木精-伊紅(HE)染色：二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min，依次進(jìn)入無(wú)水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min，蒸餾水洗；入蘇木精染液10 min，鹽酸酒精分色4 s，自來(lái)水洗10 min；依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min，入伊紅染液染色10 min；入950 mL/L及無(wú)水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明，中性樹(shù)脂封片.


一、常用染色液的配制
⒈ 碘-碘化鉀（I2-KI）溶液 能將淀粉染成藍(lán)紫色，蛋白質(zhì)染成黃色，也是植物組織化學(xué)測(cè)定的重要試劑。
配方：碘化鉀2g ； 蒸餾水300ml ； 碘1g
先將碘化鉀溶于少量蒸餾水中，待全溶解后再加碘，振蕩溶解后稀釋至300mL，保存在棕色玻璃瓶?jī)?nèi)。用時(shí)可將其稀釋2-10倍，這樣染色不致過(guò)深，效果更佳。
⒉ 蘇丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ） 能使木栓化、角質(zhì)化的細(xì)胞壁及脂肪、揮發(fā)油、樹(shù)脂等染成紅色或淡紅色，是著名的脂肪染色劑。
配方：（1）蘇丹III或蘇丹Ⅳ干粉0.1g ； 95％酒精10ml ； 過(guò)濾后再加入10ml甘油
（2）先將0.1g蘇丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。
（3）蘇丹III 70%乙醇的飽和溶液。
⒊ 1％醋酸洋紅（aceto carmine） 酸性染料，適用于壓碎涂抹制片，能使染色體染成深紅色，細(xì)胞質(zhì)成淺紅色。
配方：洋紅1g ； 45％醋酸100ml
煮沸2h左右，并隨時(shí)注意補(bǔ)充加入蒸餾水到原含量，然后冷卻過(guò)濾，加入4％鐵明礬溶液1～2滴（不能多加，否則會(huì)發(fā)生沉淀），放入棕色瓶中備用。
⒋ 改良苯芬品紅染色液（Carbol fuchsine） 核染色劑。
配制步驟： 先配成三種原液，再配成染色液。
原液A：3g堿性品紅溶于100ml 70％酒精中。
原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。
原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福爾馬林（38％的甲醛）。
（原液A和原液C可長(zhǎng)期保存，原液B限兩周內(nèi)使用）
染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1~1.8g，配成10％～20％濃度的石炭酸品紅液，放置兩周后使用，效果顯著（若立即用，則著色能力差）。
適用范圍：適用于植物組織壓片法和涂片法，染色體著色深，保存性好，使用2～3年不變質(zhì)。山梨醇為助滲劑，兼有穩(wěn)定染色液的作用，假如沒(méi)有山梨醇也能染色，但效果較差。
⒌ 中性紅（neutral red）溶液 用于染細(xì)胞中的液泡，可鑒定細(xì)胞死活。
配方：中性紅0.1g ； 蒸餾水100ml
使用時(shí)再稀釋10倍左右。
⒍ 曙紅Y（伊紅，eosin Y）酒精溶液 常與蘇木精對(duì)染，能使細(xì)胞質(zhì)染成淺紅色，起襯染作用。
配方：曙紅0.25g ； 95％酒清100ml
也常用于95％酒精脫水時(shí)，加入少量曙紅溶液，其目的是在包埋、切片、展片、鏡檢時(shí)便于識(shí)別材料。
⒎ 釕紅（ruthenium red）染液 釕紅是細(xì)胞胞間層專性染料，其配后不易保存，應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。
配方：釕紅5～10mg ； 蒸餾水25-50ml
⒏ 龍膽紫（gentian violet） 為酸性染料，適用于細(xì)菌涂抹制片。
配方：龍膽紫0.2~1 g ； 蒸餾水100ml
⒐ 苯胺蘭（aniline blue）溶液 為酸性染料，對(duì)纖維素細(xì)胞壁、非染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)、鞭毛等，尤其是染絲狀藻類效果好。還多用于與真曙紅作雙重染色，對(duì)于高等植物多用于與番紅作雙重染色。
配方：苯胺蘭1 g ； 35％或95％酒精100ml
⒑ 間苯三酚（phloroglucin）溶液 用于測(cè)定木質(zhì)素。
配方：間苯三酚5g ； 95％酒精100ml
注：此溶液呈黃褐色即失效。
⒒ 橘紅G（orange G）酒精溶液 為酸性染料，染細(xì)胞質(zhì)，常作二重或三重染色用。
配方：橘紅G 1g ； 95％酒精100ml
⒓ 番紅（safranin O） 為堿性染料，適用于染木化、角化、栓化的細(xì)胞壁，對(duì)細(xì)胞核中染色質(zhì)、染色體和花粉外壁等都可染成鮮艷的紅色。并能與固綠、苯胺蘭等作雙重染色，與橘紅G、結(jié)晶紫作三重染色。
配方：（1）番紅水溶液 番紅0.1或1 g ；蒸餾水100ml
（2）番紅酒精溶液 番紅0.5或1 g ；50％（或95％）酒精100ml
（3）苯胺番紅酒精染色液
甲液 番紅5 g +95％酒精50ml
乙液 苯胺油20ml +蒸餾水450ml
將甲、乙二溶液混合后充分搖均勻，過(guò)濾后使用。
⒔ 固綠（fast green） 又稱快綠溶液。為酸性染料，能將細(xì)胞質(zhì)，纖維素細(xì)胞壁染成鮮艷綠色，著色很快，故要很好的掌握著色時(shí)間。
配方：（1）固綠酒精液 固綠0.1 g ； 95％酒精100ml
（2）苯胺固綠酒精液 固綠 1 g ；無(wú)水酒精 100ml ；苯胺油 4ml
配后充分搖勻，過(guò)濾后使用?，F(xiàn)配現(xiàn)用效果好。
⒕ 蘇木精（hematoxylin）染液 蘇木精是植物組織制片中應(yīng)用最廣的染料，是蘇木科植物蘇木的心材提取出來(lái)的。它是很強(qiáng)的細(xì)胞核染料，而且可以分化出不同顏色。配方很多，現(xiàn)舉海登漢氏（Heidenhain's）蘇木精染色液，又稱鐵礬蘇木精染色液。
配方：甲液（媒染劑）： 硫酸鐵銨（鐵明礬）2-4g ；蒸餾水100ml
（必須保持新鮮，最好臨用之前配制）
乙液（染色劑）：蘇木精 0.5-1g ；95％酒精 10ml；蒸餾水 90ml
配制步驟：（1）將蘇木精溶于酒精中，瓶口用雙層紗布包扎，使其充分氧化（通常在室內(nèi)放置兩個(gè)月后方可使用）。（2）加入蒸餾水，塞緊瓶口，置冰箱中可長(zhǎng)期保存。
切片需先經(jīng)甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后經(jīng)水稍洗再用另一瓶甲液分色至適度。
鐵礬蘇木精染液為細(xì)胞學(xué)上染細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)最好的染色劑，但要注意甲液與乙液在任何情況下決不能混合。
⒖亞甲基藍(lán)染液 常用于細(xì)菌、活體細(xì)胞等的染色。
取0.1g亞甲基藍(lán)，溶于100ml蒸餾水中即成。
⒗詹納斯綠B（Janus green B）染液
將5.18gJanus 綠溶于100ml蒸餾水，配成飽和水溶液。用時(shí)需稀釋。稀釋的倍數(shù)應(yīng)視材料不同而異。
⒘硫堇染液
取0.25克硫堇(也稱勞氏青蓮或勞氏紫)粉末，溶于100ml蒸餾水中，即可使用。使用此液時(shí)，需要用微堿性自來(lái)水封片或用1%NaHCO3水溶液封片，能成多色反應(yīng)。
18.黑色素液
水溶性黑素10g，蒸餾水100mL，甲醛(福爾馬林)0.5mL?？捎米髑v膜的背景染色。
19.墨汁染色液 國(guó)產(chǎn)繪圖墨汁40mL，甘油2mL，液體石炭酸2mL。先將墨汁用多層紗布過(guò)濾，加甘油混勻后，水浴加熱，再加石炭酸攪勻，冷卻后備用。用作莢膜的背景染色。
20.呂氏(Loeffier)美藍(lán)染色液
A液：美藍(lán)(methylene blue,又名甲烯藍(lán))0.3g，95%乙醇30mL;
B液：0.01%KOH100mL。
混合A液和B液即成，用于細(xì)菌單染色，可長(zhǎng)期保存。根據(jù)需要可配制成稀釋美藍(lán)液，按1∶10或1∶100稀釋均可。
21.革蘭氏染色液
(1)結(jié)晶紫(cristal violet)液：結(jié)晶紫乙醇飽和液(結(jié)晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸銨水溶液80mL。將兩液混勻置24h后過(guò)濾即成。此液不易保存，如有沉淀出現(xiàn)，需重新配制。
(2)蘆戈(Lugol)氏碘液：碘1g，KI 2g，蒸餾水300mL。先將KI溶于少量蒸餾水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸餾水至300mL，即成。配成后貯于棕色瓶?jī)?nèi)備用，如變?yōu)闇\黃色 能使用。
(3)95%乙醇：用于脫色，脫色后可選用以下(4)或(5)的其中一項(xiàng)復(fù)染即可。
(4)稀釋石炭酸復(fù)紅溶液：堿性復(fù)紅乙醇飽液(堿性復(fù)紅1g，95%乙醇10mL，5%石炭酸90mL)10mL，加蒸餾水90mL。
(5)番紅溶液：番紅O(safranine O，又稱沙黃O)2.5g，95%乙醇100mL，溶解后可貯存于密閉的棕色瓶中，用時(shí)取20mL與80mL蒸餾水混勻即可。
以上染色液配合使用，可區(qū)分出革蘭氏染色陽(yáng)性(G+ )或陰性(G- )細(xì)菌，前者藍(lán)紫色，后者淡紅色。
22.齊氏(Ziehl)石炭酸復(fù)紅液：堿性復(fù)紅0.3g溶于95%乙醇10mL中為A液；0.01%KOH溶液100mL為B液。混合A、B液即成。
23.姬姆薩(Giemsa)染液
(1)貯存液：稱取姬姆薩粉0.5g，甘油33mL，甲醇33mL。先將姬姆薩粉研細(xì)，再逐滴加入甘油，繼續(xù)研磨，最后加入甲醇，在56℃放置1-24h后即可使用。
(2)應(yīng)用液(臨用時(shí)配制)：取1mL貯存液加19mLpH7.4磷酸緩沖液即成。也可以貯存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液。
24. 1%瑞氏(Wright's)染色液
稱取瑞氏染色粉6g，放研缽內(nèi)磨細(xì)，不斷滴加甲醇(共600mL)并繼續(xù)研磨使溶解。經(jīng)過(guò)濾后染液須貯存一年以上才可使用，保存時(shí)間愈久，則染色色澤愈佳。

二、常用試劑的配制
(一)顯微鏡鏡頭清潔劑
將乙醚和乙醇按7∶3混合，裝入滴瓶備用。用于擦拭顯微鏡鏡頭上油跡和污垢等（注意瓶口必須塞緊，以免揮發(fā)）。
(二)固定液
1.福爾馬林-乙酸-酒精固定液（FAA，又稱萬(wàn)能固定劑）
福爾馬林（38％甲醛）5ml＋冰乙酸5ml＋70％酒精90 ml，可用于固定植物的一般組織，但不適用于單細(xì)胞及絲狀藻類。幼嫩材料用50％酒精代替70％酒精，可防止材料收縮；還可加入5ml甘油（丙三醇）以防蒸發(fā)和材料變硬。FAA 可兼作保存劑。
2.福爾馬林-丙酸-酒精固定液（FPA）
福爾馬林5ml＋丙酸5ml＋70％酒精90ml，用于固定一般的植物材料，通常固定24h，效果比FAA 好，并可長(zhǎng)期保存。
3.福爾馬林-丙酸-氯仿固定液（卡諾固定液）
配方一：無(wú)水酒精3份＋冰乙酸1份。
配方二：無(wú)水酒精6份＋冰乙酸1份＋氯仿3份。
是研究植物細(xì)胞分裂和染色的優(yōu)良固定液，材料固定后，用95％和85％的酒精浸洗，清洗2-3次，也可轉(zhuǎn)入70％酒精中保存?zhèn)溆谩?
4.甘油-酒精軟化劑
甘油1份＋50％或70％酒精1份，適用于木材的軟化，將木質(zhì)化根、莖等材料排除空氣后浸入軟化液中，時(shí)間至少一周或更長(zhǎng)一些，也可將材料保存于其中備用。
5. 鉻酸-乙酸固定液
根據(jù)固定對(duì)象的不同，可分強(qiáng)、中、弱3種不同的配方：
弱液配方：10％鉻酸2.5 ml＋10％乙酸5.0 ml＋蒸餾水92.5ml。
中液配方：10％鉻酸7 ml+10％乙酸10 ml＋蒸餾水83 ml。
強(qiáng)液配方：10％鉻酸10 ml+10％乙酸30 ml＋蒸餾水60 m1。
弱液用于固定較柔嫩的材料，例如藻類、真菌類、苔藥植物和蕨類的原葉體等，固定時(shí)間較短，一般為數(shù)小時(shí)，最長(zhǎng)可固定12-24 h，但藻類和蕨類的原葉體可縮短到幾分鐘到1h。
中液用作固定根尖、莖尖、小的子房和胚珠等，固定時(shí)間12-24 h或更長(zhǎng)。
強(qiáng)液適用于木質(zhì)的根、莖和堅(jiān)韌的葉子、成熟的子房等。為了易于滲透，可在中液和強(qiáng)液中另加入2％的麥芽糖或尿素。固定時(shí)間12-24 h或更長(zhǎng)。
(三)離析液
1. 鉻酸-硝酸離析液
鉻酸為三氧化鉻的水溶液：(1) 10 ml鉻酸；(2) 10 ml濃硝酸。
將上述兩液等量混合均勻后再使用。適于對(duì)導(dǎo)管、管胞、纖維等木質(zhì)化的組織進(jìn)行解離時(shí)使用。
2. 鹽酸-酒精固定離析液
將濃鹽酸、95％酒精等量混合備用，一般用于離析根尖細(xì)胞。
(四)解離液
常用于根尖等細(xì)胞的涂片，它能使細(xì)胞壁中層（果膠質(zhì)）溶解，而使細(xì)胞分開(kāi)。
1．鹽酸酒精
配方:95%酒精 1份，濃鹽酸1份。二者混合即成。
2．鹽酸溶液
（1）1 mol／L鹽酸
配方：濃鹽酸（比重1.19） 82.5ml
用蒸餾水定容 1 000ml
（2）0.2mol／L鹽酸
配方：濃鹽酸（比重1.19） 16.5ml
用蒸餾水定容 1 000m1
鹽酸水解時(shí)間對(duì)染色效果影響很大，水解時(shí)間短，易著色但較難壓片；水解時(shí)間長(zhǎng)，染色慢而色淡；超過(guò)20min或水解溫度過(guò)高，往往染色極淡，或染不上色。各種材料最合適的時(shí)間有差別，一般來(lái)說(shuō)，大染色體材料水解時(shí)間可較長(zhǎng)，小染色體材料宜短。
改用0.2mol／L鹽酸于60℃恒溫下水解10～15min，對(duì)各種類型材料都能獲得細(xì)胞分離和染色合適的較好效果。
(五)預(yù)處理液
用于根尖壓片的前處理，能使細(xì)胞有絲分裂染色體縮短。
1．0.002mol/L 8-羥基奎林水溶液 稱取0.29g 8-羥基奎林溶于1 000ml蒸餾水中。
2．對(duì)二氯代苯飽和水溶液 將對(duì)二氯代苯加入蒸餾水中攪拌至不再溶解為止，即成飽和水溶液。
(六)各級(jí)酒精的配制
由于無(wú)水乙醇價(jià)格較高，故常用95％的酒精配制。配制方法很簡(jiǎn)便，用95％的酒精加上一定量的蒸餾水即可?？砂聪铝泄酵扑悖?
（原酒精濃度值（95％）－最終酒精濃度值）×100＝所需加水量
最終酒精濃度 95％酒精用量 蒸餾水量
85％ 85ml 10ml
70％ 70ml 25ml
50％ 50ml 45ml
30％ 30ml 65ml
(七)其他試劑
1. 0.7%生理鹽水 取NaCl 0.7g溶于100mL蒸餾水中。用于兩棲類動(dòng)物。
2. 1%硝酸銀溶液 稱取1克硝酸銀,溶于100毫升蒸餾水中即可。
3.碘酒
取碘2g和KI 1.5g，先加入少量的75%乙醇攪拌，待溶解后再用75%乙醇稀釋至100mL
4. 樹(shù)膠封固劑
將固體的加拿大樹(shù)膠塊，溶解于二甲苯或正丁醇中，濃度要適當(dāng)（注意絕對(duì)不能混入水或酒精），是玻片標(biāo)本好的封固劑。也可用人工合成的中性樹(shù)膠代替。
5. 明膠粘貼劑
明膠1-2 g＋石碳酸（苯酚）2g＋蒸餾水100ml＋甘油15ml。
配法：先將蒸餾水加溫至30-40℃，慢慢加入明膠，待全部溶解后，再加入2g苯酚和15ml甘油，攪拌至全溶為止，然后用紗布過(guò)濾，濾液貯于瓶中備用。
6.標(biāo)本消毒劑
用于臘葉標(biāo)本消毒，常用0.4％~1%升汞酒精溶液（95％酒精1 000ml+4 g升汞），浸泡標(biāo)本0.5～2min。升汞有劇毒，不要弄到手上，消毒后注意洗手。