石蠟切片基本步驟之一 器材和試劑

一、準備工作

（一）洗滌實驗所需器皿：（玻璃器皿的清洗）      

1、 用洗衣粉將玻璃器皿表里擦洗干凈反復洗刷

2、 將器皿在自來水下沖洗干凈

3、 將器皿倒扣在鋪有吸水紙或紗布的桌子上控干

注：一般情況下，經(jīng)以上步驟后，用蒸餾水洗過1~3次即可烘干備用，如果做特殊染色還需浸泡在酸性清潔液內12~24小時，再經(jīng)自來水徹底沖洗，再用蒸餾水過洗1~3次 烘干備用。

（二）配制： 硫酸洗液的配制

（三）載玻片與蓋玻片的處理

1. 將所需載玻片與蓋玻片清洗后，放入硫酸重鉻酸鉀溶液中浸泡24小時

2. 流水沖洗，再用蒸餾水沖洗3遍

3. 95%~100%酒精浸泡24小時，用綢布擦干備用

注：在將載玻片與蓋玻片放入清潔液中時，要一片片地投入，使其不致重疊。

二、常用液體的配制

（一）緩沖溶液：

1．磷酸鹽緩沖液

A液：0.1mol/L磷酸二氫鈉

B液：0.1mol/L磷酸氫二鈉

A液與B液按比例混合調整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）

2．枸椽酸緩沖溶液

A液：0.1mol/L枸椽酸

B液：0.1mol/L枸椽酸鈉

A液與B液按比例混合調整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）

（二）固定劑：

1．甲醛：10%甲醛

福爾馬林 100ml

蒸餾水 900ml

注：實際甲醛含量只有3.6~4.0%但習慣上都將其視為10%。

2．10％中性福爾馬林鈣固定液

甲醛液 10ml

蒸餾水 90ml

加碳酸鈣至過飽和(以容器底部碳酸鈣沉淀1~2cm厚為適度)充分振蕩混合后，放置24小時取上清液使用。

3．4%多聚甲醛：

8%多聚甲醛

多聚甲醛 8g

蒸餾水 100ml

加溫至60℃左右，不時攪拌，成為乳白色溶液。滴加1N NaOH，并不停攪動至液體清明。

1N NaOH

lN等于1L溶液中某種物質1mol除以該物質的氫當量價所得數(shù)值的量

氧化鈉(NaOH )；分子量＝40．005，當量價＝1

1N Na0H的配制方法為：m＝40．005／1＝40．005g。取40．005gNaOH溶解于1L蒸餾水中

4%多聚甲醛

8%多聚甲醛 50ml

0.1M磷酸鹽緩沖液 50ml

PH7.2

先取50 ml 8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氫鈉和0.1M磷酸氫二鈉將PH值調至7.2

4．Bouin液：

苦味酸飽和水溶液 75ml

36％~40％福爾馬林液 25ml

冰醋酸 5m1

5．改良Bouin氏固定液

苦味酸飽和水溶液 45ml

95%酒精 45ml

36％~40％福爾馬林液 5ml

冰醋酸 5m1

6．Carnoy液：

冰醋酸 10 m1

氯仿 30 m1

無水乙醇 60 m1

以上三者臨用前混合，預冷至4℃后使用。24小時后固定液失效。

（三）染色液

1．Harris蘇木精液

A液：

蘇木精 1g

無水酒精 10ml

B液：

銨礬或鉀礬 20g

蒸餾水 200ml

氧化汞 0.5ml

冰醋酸 8ml

將礬溶于水，加熱溶解（B液），稍冷后將蘇木精酒精液（A液）混入B液，加熱，稍冷卻，加氧化汞，再繼續(xù)加熱1分鐘，染液變?yōu)樽仙⒁庠诩友趸瘯r宜逐漸少量加入，防止染液濺出。全冷后呈深紫色，將燒杯口用紗布蓋好，隔夜過濾，在過濾液內每96 ml中加4 ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期1~2個月。此染液在加醋酸后，對核染色特具選擇性，故很適于脫落細胞的核染色。由于染液內已加有氧化劑，故不能長期儲存，但利于配后即用。

2．Mayer蘇木精掖

蘇木精 1g

鉀礬或銨礬 50g

碘酸鈉 0.2g

蒸餾水 1000ml

水合氯醛 50g

枸櫞酸 1g

將蘇木精，鉀礬及碘酸鈉依次加入水內，略加熱并攪拌，此時液體呈藍色，待全溶后過夜。再加入水合氯醛及枸櫞酸并加熱至煮沸5分鐘，冷后過濾備用。如不急用可不煮沸而在室溫待其成熟，染液可較長期貯存使用。核染色鮮明，染色時間5—10分鐘。用該染液染色后，不需分化，充分水洗藍化后即可，伊紅復染細胞質，使用一段時間后就要換新溶液。

3．Hasnsen甲礬蘇木精的配制

A液：蘇木精 1g

無水乙醇 10ml

B液：鉀礬 20g

蒸餾水 200ml

C液：高錳酸鉀 1g

蒸餾水 16ml

三液分別溶化后，將A液倒入B液，再加入C液3ml，充分攪拌均勻后加熱至沸騰，1分鐘左右，將容器置于冷水中使其迅速冷卻，此液配后即可使用，染后無需堿化，細胞核即為藍色，效果較好，高錳酸鉀可以迅速氧化蘇木精（每1g蘇木精需0.177g高錳酸鉀氧化）。

4．伊紅

0.5~1%水溶液或酒精溶液。

1．水溶性伊紅

伊紅 5~10g

蒸餾水 1000ml

冰醋酸 10滴

先將水溶性伊紅加入蒸餾水中，用玻璃棒攪起泡沫后過濾，再加冰醋酸。

2．醇溶性伊紅

伊紅 5~10g

70%~90%酒精 1000ml

冰醋酸 10滴

（四）其它

1．麻醉劑：

2~4%戊巴比妥鈉，1ml/kg體重（45mg/kg）。

2．各級濃度酒精的配制

75%；85%；95%；100%酒精。75%和85%酒精用95%酒精配制；（取75ml95%酒精，加水至95ml，即為75%酒精）

3．鹽酸灑精

多用于多種染色過程中的分色，如蘇木精染色后分色。配法是在100ml的70％酒精內加0.5~1ml的濃鹽酸(Hcl)。用鹽酸酒精分色后要經(jīng)自來水充分沖洗組織切片，去除所含的酸再作其他處理。

4．碘酒

取碘5g，溶于95％酒精80ml，再加入20ml蒸溜水即成

5．生理鹽水

以氯化納0.85~0.90g溶于100m1蒸餾水配成的生理鹽水適用哺乳動物