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解讀病理切片中常出現(xiàn)的問題及對(duì)策瀏覽數(shù):123次
常規(guī)石蠟切片技術(shù)是病理工作中的重要環(huán)節(jié),切片質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響病理診斷的準(zhǔn)確性。常規(guī)的病理切片常常也會(huì)出現(xiàn)問題,下面我們來分析一下其中的原因,并且總結(jié)一下對(duì)策。 一、材料與方法 材料:材料均來源于福建省廈門市第一醫(yī)院病理科工作中的活體組織標(biāo)本。
方法:按規(guī)范對(duì)送檢標(biāo)本進(jìn)行固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、制作切片及染色,并注意以下操作環(huán)節(jié)。
a、組織充分固 定,含鈣組織徹底脫鈣,脫水透明適當(dāng),切片厚薄適宜,染色 時(shí)避免沖洗過猛,以克服脫片問題。 b、注意組織處理各環(huán)節(jié),調(diào)節(jié)展片溫度,以克服切片彌散現(xiàn)象。 c、注意組織固定、脫水,調(diào)好切片刀與切片機(jī),保持切片刀刀刃情況良好,以克服 切片不完整問題。 d、注意取材、固定、脫水、切片、染色各環(huán) 節(jié),克服切片染色不均。 e、注意固定、取材、包埋、切片、染色、封片等環(huán)節(jié),克服切片染色模糊不清現(xiàn)象。 f、注意切片、展片 和封片環(huán)節(jié),避免切片產(chǎn)生氣泡。 g、注意取材與制片各環(huán)節(jié),避免滑石粉、甲醛色素結(jié)晶、升汞結(jié)晶、其他組織碎屑、蘇木 素染液中的氧化膜污染切片。 二、結(jié)果 組織切面完整、厚薄適度、無刀痕、無裂隙、無顫痕、無皺 褶、無折疊、無污染、無松散、裱貼位置適當(dāng)。細(xì)胞核呈藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維和紅細(xì)胞呈不同程度的紅色,組織 著色適中、色澤鮮艷、細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)染色對(duì)比清晰、切片整潔、封片無溢膠、無氣泡、標(biāo)簽端正粘牢、編號(hào)清晰。 三、討論 A、脫片 組織自身原因:如血凝塊、血栓、干涸或過硬的組織;含膠原豐富的甲狀腺、腎上腺等組織;脫鈣不徹底的骨組織;部分鈣化的組織。
組織處理不當(dāng):脫水、透明不足,以致石蠟不能浸入;組織脫水、透明過度,浸蠟時(shí)間過長或溫度太高,引起組織收縮硬脆,導(dǎo)致切片不完整,染色時(shí)導(dǎo)致脫落。
切片原因:切片過厚,切片破碎不整齊。展片水溫低,切片有皺褶、貼附不牢或切片下有氣泡??酒瑫r(shí)間短或溫度低;烤片溫度過高或時(shí)間過長,組織被烤焦或收縮變形發(fā)生皺褶,易脫片。載玻片不潔凈也易引起脫片。
染色:脫蠟后未經(jīng)高至低濃度的各級(jí)乙醇逐漸入水,或染色時(shí),用水沖洗過猛或振蕩過度,或鹽酸酒精分化后入水沖洗過猛,均易引起脫片。
對(duì)策:對(duì)發(fā)脆的組織,可將蠟塊修好后,組織面朝下放入冰水混合液中10 min 左右再切片,或用棉球蘸5%氨水涂抹蠟塊組織表面10s左右;遇到脫鈣不徹底的骨組織或部分鈣化的組織,蠟塊修好后,將組織面朝下放入 10%~20%的鹽 酸溶液中補(bǔ)充脫鈣,脫鈣過程可隨時(shí)以針輕刺組織面,無阻力感視為脫鈣徹底;切片不當(dāng)者,應(yīng)重新切片,并調(diào)整適當(dāng)?shù)恼蛊c烤片溫度;選用潔凈的載玻片;切片脫蠟后須嚴(yán)格經(jīng)高至 低濃度的各級(jí)乙醇逐漸入水,染色過程避免沖洗過猛。
B、切片彌散現(xiàn)象 組織自身原因:如內(nèi)窺鏡組織、膀胱移行細(xì)胞癌、皮脂腺囊腫、脂肪瘤、部分壞死的組織等。
組織處理不當(dāng):組織固定不佳,脫水、透明、浸蠟不足。
展片溫度過高:對(duì)策:組織自身松散、互不相連者,應(yīng)調(diào) 低展片水溫,或?qū)⑶谐龅南炂?10%~20%的酒精溶液中展片后即撈出,不經(jīng)溫水展片;組織取材固定不佳者,在條件允許的情況下,按規(guī)范重新取材和固定;脫水、透明、浸蠟不當(dāng)者,在不影響診斷的原則下將組織重新脫水、透明、浸蠟;切片過 程中,應(yīng)注意隨時(shí)調(diào)整好展片溫度。 C、切片不完整原因: a、組織固定不佳、脫水不當(dāng),致使石蠟無法浸入組織內(nèi),包埋后蠟塊中央出現(xiàn)凹陷,或組織與蠟之間產(chǎn)生灰白色暈圈;或組織變硬脆,組織硬度大于石蠟硬度。 b、切片刀角度不合適、切片機(jī)不穩(wěn)、刀片夾持不穩(wěn)、刀鈍不鋒利、組織塊過大等可造成切片不完整、厚薄不均、刀痕、裂隙、顫痕、皺褶。 c、刀片使用過久,形成刀口深淺不一、寬窄不等的缺口;刀口上黏附細(xì)微纖維(如毛發(fā)、布絲),可造成切片不完整和裂痕。 d、展片水溫過低,蠟片皺折不易展開,易形成皺褶。
對(duì)策:組織固定不佳者,在條件允許的情況下,按規(guī)范重新取材和固定;脫水不當(dāng)者,在不影響診斷的原則下將組織重新脫水、透明、浸蠟;調(diào)整適宜的切片刀角度,一般為8度~10度;經(jīng)常檢修保養(yǎng)切片機(jī),調(diào)整切片機(jī)的平穩(wěn)位置,減少機(jī)械振 蕩;檢查刀片是否夾持穩(wěn)固,注意去除刀片與持刀器狹縫之間的蠟屑;檢查切片刀是否鋒利,簡(jiǎn)便的方法是用頭發(fā)在刀鋒上碰一下,如一碰即斷說明刀鋒鋒利;檢查切片刀有無缺口,注意去除切片刀上的黏附物;切片過程中,應(yīng)注意隨時(shí)調(diào)整好展片溫度。 D、切片染色不均 組織取材固定不當(dāng):如取材過大或過厚、所用之固定液 濃度過大、穿透力較小時(shí),不能將組織完全固定。
組織脫水時(shí)間過短:組織中含有水分,進(jìn)而使透明、浸蠟不徹底。切片:厚薄不均或有橫紋。
染色過程處理不當(dāng):組織切片脫蠟不徹底;分化不當(dāng)、分化液濃度過大、分化后沒有迅速入水終止分化。
對(duì)策:組織取材固定不當(dāng)者,在條件允許的情況下,按規(guī)范重新取材和固定;脫水不當(dāng)者,在不影響診斷的原則下將組織重新脫水透明浸蠟;切片與染色處理不當(dāng)者,應(yīng)重新切。
E、切片染色模糊不清 固定液濃度不當(dāng)、取材組織塊過大或過厚,常造成組織中央固定不佳,而出現(xiàn)切片染色發(fā)灰現(xiàn)象。組織標(biāo)本已經(jīng)發(fā)生霉腐自溶,或取材后沒有及時(shí)固定、固定液濃度不夠。包埋時(shí)如果溫度過高或切片后烤片溫度過高,均會(huì)使組織蛋白質(zhì)發(fā)生質(zhì)變,造成切片染色模糊不清。切片脫蠟不徹底可造成不著色或著色很淡。染料質(zhì)量差或染色液配制不當(dāng),如配制蘇木素時(shí)加熱過度造成過度氧化,不能生成三氧 化蘇木紅,生成四氧化蘇木紅,使染液沒有染色能力;或蘇木素使用時(shí)間過久,導(dǎo)致切片著色不良,切片模糊不清。分化過度,細(xì)胞染色較淡,造成切片模糊難辨。切片脫水,透明不徹底。封固劑接觸水或其他液體;口、鼻呼出的氣體接觸組織切片上的封固劑均可造成切片模糊不清。
對(duì)策:組織固定、取材、包埋溫度不當(dāng)者,條件允許的情況 下,重新固定、取材,調(diào)整適當(dāng)?shù)陌?、烤片溫度;切片脫蠟?徹底、染色不當(dāng)者,退回重新脫蠟、染色、脫水、透明;封固不當(dāng)者,移去蓋玻片,將切片放入二甲苯中脫去原來的封固劑,重新封片。 F、產(chǎn)生氣泡 切片厚薄不均、切片不平整。展片水溫過低,組織未 展開或水底產(chǎn)生的氣泡浮到組織上,腦組織等在撈片時(shí)組織下面易產(chǎn)生氣泡。封固劑過稀或過稠、封固時(shí)操作不當(dāng)、封固劑擴(kuò)散不均易產(chǎn)生氣泡。
對(duì)策:切片厚薄不均、不平整、組織未展開等產(chǎn)生氣泡者,應(yīng)重新切片;封固不當(dāng)者,移去蓋玻片,將切片放入二甲苯中脫去原來的封固劑,重新封片。
G、污染 組織內(nèi)混有滑石粉、甲醛色素結(jié)晶、升汞結(jié)晶。取材中操作臺(tái)上殘留的破碎組織混入相鄰其他組織內(nèi)。刀刃不凈,粘有其他切片的蠟屑。展片水表面污染,載玻片不潔凈。切片中出現(xiàn)藍(lán)黑色沉淀物,為蘇木素染液中的金屬膜黏附 在玻片上。
對(duì)策:取材前應(yīng)將手套、取材臺(tái)面、取材工具洗凈,防止交叉污染;配制緩沖中性甲醛,定期防止、去除甲醛色素結(jié)晶和升汞結(jié)晶;注意去除切片刀上的蠟屑和黏附物;保持展片表面 清潔,防止交叉污染;選用潔凈的載玻片;每天染色前仔細(xì)過 濾蘇木素染液,或使用半氧化蘇木素染液。
病理切片制作,首先必須要有高度的責(zé)任心,更要嚴(yán)格遵守制片的操作規(guī)范。經(jīng)常做切片制作后的總結(jié)工作,不斷優(yōu)化制作方法,可制作出優(yōu)良的病理切片。 深圳市鵬一醫(yī)療儀器有限公司專注液基制片,液基細(xì)胞染色設(shè)備及耗材研制,為『液基細(xì)胞、液基技術(shù)』專業(yè)服務(wù)商,欲了解更多公司液基產(chǎn)品細(xì)節(jié)及相關(guān)報(bào)價(jià)可點(diǎn)擊鵬一官方網(wǎng)站http://www.szpymed.com或http://www.szpym.com,也可以直接撥打咨詢熱線4000755996或13926110601,相關(guān)人員會(huì)詳細(xì)解答!! |