制作優(yōu)質(zhì)LCT液基細胞片的方法與探討

2011年7月25日 《中國實用醫(yī)藥》2011年第21期

   【摘要】 目的 探討如何制作優(yōu)質(zhì)的LCT液基細胞學(xué)片子。方法 對LCT液基細胞學(xué)片制作過程中容易出現(xiàn)的問題加以改進。結(jié)果 LCT液基片涂片均勻一致，顏色清晰、背景干凈、無非特異性染色，節(jié)省了病理醫(yī)生閱片的時間，降低了誤診率，提高工作效率。結(jié)論 制作的優(yōu)質(zhì)LCT液基細胞片大大提高了宮頸病變的陽性診斷率，值得推廣。

   【關(guān)鍵詞】 LCT液基細胞取材;振蕩;粘附劑;染色, http://www.szpymed.com

   【Abstract】 Objective To discuss the method of manufactures the high quality LCT fluid basal cell study flat and thin piece. Methods The question which easy to appear to the LCT fluid basal cell study piece manufacture process was impraved.ResultsLCT fluid substrate smear even consistent, the color is clear, the background clean, nothing but the specificity dyed, saves pathology doctor to read the piece the time, reduced the error diagnostic rate, raised the working efficiency.Conclusion Make high quality LCT fiuid basal cell can the positive increase diagnosis rate of cervical lesions,it is worthy of clinic application.

   【Key words】 LCT fluid basal cell selection; Vibration;Adhesion agent; Dyeing    http://www.szpymed.com

   液基細胞學(xué)檢查是采用液基薄層細胞檢測系統(tǒng)檢測宮頸細胞并進行細胞學(xué)分類篩選及診斷，它是目前國際上較先進的一種宮頸癌細胞學(xué)檢查技術(shù)，與傳統(tǒng)的宮頸刮片巴氏染色檢查相比明顯提高了標(biāo)本的滿意度及宮頸異常細胞檢出率，宮頸防癌細胞學(xué)檢查對宮頸癌細胞的檢出率為100%，同時還能發(fā)現(xiàn)部分癌前病變，微生物感染如霉菌、滴蟲、病毒、衣原體等。液基技術(shù)是應(yīng)用于婦女宮頸癌篩查的一項先進的技術(shù)。那么怎樣才能制作出一張優(yōu)質(zhì)的液基細胞學(xué)片呢？制作優(yōu)質(zhì)LCT液基細胞片跟臨床醫(yī)生取材、固定、技術(shù)員的制片及染色密切相關(guān)，每一步都要求嚴(yán)格操作。

   1 材料與儀器

   取材毛刷、液基細胞保存瓶、載玻片、細胞粘附劑、離心管、離心機、轉(zhuǎn)移器、真空泵、微型旋渦混合儀、染色架、染色槽、100%酒精、PBS緩沖液、蘇木素染液、EA/OG染液、二甲苯、蓋玻片、中性樹膠。

   2 方法

   作者將制作優(yōu)質(zhì)LCT液基細胞片闡述如下。①臨床醫(yī)生取材，要求使用一次性宮頸取樣刷，取材時把毛刷中間較長的部分插入宮頸管，外側(cè)毛刷抵住宮頸外口，力度適中的推向?qū)m頸，并按順時針方向3～5圈，取出刷頭全部放入細胞保存液;②收集標(biāo)本、振蕩標(biāo)本瓶30 s;③于干凈的玻璃片上涂上細胞粘附劑、自然干燥或37度恒溫箱干燥;④于離心管上加入4 ml的細胞分離提取液;⑤用注射轉(zhuǎn)移器吸取標(biāo)本瓶內(nèi)標(biāo)本置加有分離提取液的離心管上；⑥離心1107轉(zhuǎn)、離心力200 g、2 min;⑦用真空泵、把離心管上的上清液慢慢吸走;⑧離心2214轉(zhuǎn)、離心力800 g、10 min;⑨棄上清液，把離心管放在微型旋渦混合儀轉(zhuǎn)動不同方向振蕩，靜止10 min;⑩于此離心管上加入400～600 ml的PBS緩沖液;[11]染色架上放上涂有細胞粘附劑的玻片，放上染色槽，吸取400 ml的標(biāo)本液于染色槽內(nèi);[12]靜上5 min，倒掉染色槽內(nèi)的標(biāo)本;[13]加入100%酒精于染色槽內(nèi)固定1 min、傾倒，加入PBS緩沖液于染色槽內(nèi)2次各1 min、傾倒；[14]加入蘇木素染色劑2 min傾倒；[15]加入100%酒精2次各1 min、傾倒；[16]加入PBS緩沖液于染色槽內(nèi)2次各1 min、傾倒；[17]加入EA/OG染色劑6 min傾倒；[18]加入100%酒精3次各1 min傾倒；[19]御下染色槽把玻片放入裝在玻片架上于100%酒精脫水、二甲苯透明；[20]中性樹膠封片。

   2 結(jié)果

   液基細胞片涂片薄、均勻一致，顏色清晰，背景干凈，有效診斷細胞充足，從而提高了涂片陽性檢出率，且制片后保存時間長。

   3 討論

   臨床醫(yī)生取材部位要準(zhǔn)確、力度要適中，保證將關(guān)鍵部位[1](如宮頸鱗柱交界處)的細胞收集到。如果臨床在做了陰道鏡，在宮頸涂過醋酸或者碘等之后再取材，細胞就容易融掉，所以陰道鏡和LCT液基細胞學(xué)取材應(yīng)分開，取樣前48 h避免性生活、陰道用藥和沖洗。取材后的宮頸刷刷頭應(yīng)立即浸入細胞保存液中，避免了常規(guī)巴氏涂片過程中遺留在取材器上的細胞隨取材器一起被拋棄和細胞過度干燥[2]。振蕩保存瓶，至少30 s，使刷頭上的細胞能全部洗到保存液里。涂粘附劑的載玻片必須要干凈，粘附劑分布才均勻，且涂上粘附劑的載玻片最好不要隔夜使用，載玻片應(yīng)完全干燥，如遇潮濕天氣，玻片應(yīng)放置37℃恒溫箱內(nèi)干燥，打開后的細胞粘附劑使用時間一般不超過3個月，否則都會導(dǎo)致細胞與玻片粘附力下降，細胞量減少。用注射轉(zhuǎn)移器吸取標(biāo)本瓶內(nèi)標(biāo)本至離心管，吸取時應(yīng)來回混勻標(biāo)本，使細胞能夠最大量地被吸取。第一次離心后用真空泵吸取上清液，吸取時應(yīng)慢慢放入吸取，以免標(biāo)本污染真空泵上的白色接頭，導(dǎo)致標(biāo)本交叉污染。第二次離心后把上清液倒掉，于微型旋渦混合儀上轉(zhuǎn)動不同方向盡可能把標(biāo)本振蕩1～2 min，避免細胞重疊。于此離心管上加入200～400 ml的PBS緩沖液(可視標(biāo)本多少加入)。把預(yù)處理的載玻片放在染色架上，安上染色槽，吸取200～400 ml標(biāo)本液于染色槽內(nèi)，標(biāo)本應(yīng)靜止至少5 min，使細胞與玻片盡可能地粘附，防止染色過程中脫片。棄去染色槽內(nèi)的標(biāo)本,染色前固定應(yīng)用100%酒精，PBS緩沖液pH值應(yīng)為7.2～7.4，染色時間充足，這樣才能保證蘇木素和EA/OG顏色清晰，且不易褪色。巴氏染色的涂片[2]，保存時間短，胞漿褪色較快，如果染色效果差，保存時間就更短。所以染色時則應(yīng)注意：①染色過程中，EA/OG上色應(yīng)足夠，其實胞漿染色時間適當(dāng)久一點，在鏡下不會有太多影響，但對防止片子過早褪色是有幫助的。②染色過程中，pH值應(yīng)控制好，一般來說褪色是由于偏堿所致，EA/OG在堿性環(huán)境中不容易上色，即使上色了其結(jié)合性也不好，時間久了就容易褪色。③染色完成后，片子不應(yīng)在酒精中浸泡過久，EA/OG的上色很大程度上是一種物理作用，酒精浸泡會使其褪色并影響長時間的保存。④封片時中性樹膠二甲苯稀釋過多，這樣封出來的片子，密封性不好，時間久也會褪色，尤其會加速蘇木素的褪色。⑤實驗室濕度高于75%時，也會影響EA/OG染色，故遇下雨或潮濕天氣，應(yīng)關(guān)閉門窗，最好安裝一臺抽濕機，保持干燥的室內(nèi)環(huán)鏡，穩(wěn)定染色效果。⑥天氣寒冷時不易上色，蘇木精、EA/OG染色時間也應(yīng)相應(yīng)延長。⑦蘇木素應(yīng)經(jīng)常過濾，避免染料沉渣污染細胞片。透明用酒精、二甲苯應(yīng)該每星期更換一次，以保證細胞脫水徹底，片子清晰，透亮。液基細胞學(xué)采用專用的刷狀取樣器，能取到幾乎所有的宮頸細胞，包括宮頸管內(nèi)膜細胞。通過對樣本的離心沉淀，分離樣本中的雜質(zhì)如：血液、粘液、細胞碎片等，從而得到較為“干凈”的宮頸上皮細胞，再將細胞薄層平鋪制片，至使細胞結(jié)構(gòu)清晰，背景干凈[4]。與傳統(tǒng)的宮頸涂片相比，其優(yōu)點顯而易見，并大大提高了宮頸病變的陽性診斷率，漏診率下降。ll5\m, 百拇醫(yī)藥

   參 考 文 獻

   [1] 張紅麗,張瑜,張海雁,等.傳統(tǒng)宮頸細胞學(xué)檢查與液基細胞學(xué)檢測的比較與評價，實用醫(yī)技雜志社，2008，15(28)：3804.

   [2] 滕淑文,何曉麗.液基薄層細胞學(xué)檢測法在宮頸癌篩查中的應(yīng)用.中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2006，9(8)：788-7902.

   [3] 馬博文，賈支紅，苗新芳.子宮頸細胞病理學(xué)診斷圖譜，人民軍醫(yī)出版社,2000:31-35.

   [4] 謝逢春.液基細胞學(xué)檢查在子宮頸病變診斷中的應(yīng)用研究雜志.中外健康摘，2011，13(8)：14-15.(曹婉維 王曉鴻 鄭燕璇)