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蘇木素的種類及其配制法、伊紅染液的配制法-常規(guī)石蠟切片制作瀏覽數(shù):97次
一、蘇木素的種類及其配制法 蘇木素是一種天然染料，它的獲得是從蘇木素的樹心提煉而成的，市售略帶淺褐色結(jié)晶，易溶于酒精和甘油，較難溶于水，需加熱才能溶解。蘇木素產(chǎn)生于墨西哥的坎佩切，國內(nèi)使用的幾乎都為進口。 蘇木素作為單一的染色是不行的，它染色力弱，必須具備兩個條件才能具有強的染色力。一是產(chǎn)生有效成分蘇木紅，二是加入媒染劑。蘇木紅的產(chǎn)生需經(jīng)氧化才能獲得，獲得蘇木紅有兩種方法，一是天然成熟，蘇木素與其它試劑混合好后，暴露于陽光或亮處，在自然光的作用下，慢慢地氧化成熟，但時間較長，一般需四周左右。二是加入化學試劑促進成熟，如加入黃*色氧化汞或碘酸鈉促使蘇木素成熟。快速成熟的蘇木素溶液有的可馬上使用如Mayer氏蘇木素，有的則需隔天使用。 蘇木素種類較多，用法各異，有的用于常規(guī)染色，有的則用于特殊染色。 （1）明礬蘇木素 1．Harris氏蘇木素（1990）
該溶液為當前最廣泛使用的染液，由于它染色時間短，效果好，很受使用者的歡迎。 配制時，先將蘇木素溶于酒精（平時也可將蘇木素以10%的濃度溶解好，貯存?zhèn)溆茫?，取?000ml的三角燒瓶，傾入鉀明礬，加入蒸餾水，于電爐上加熱，熔解鉀明礬，完全熔解后，待溫度至90℃左右時，加入預先溶解好的酒精蘇木素，繼續(xù)加熱至沸騰，延續(xù)3-5min，此時溶液逐漸加深，變?yōu)樽霞t色，拔離電源，加入黃*色氧化汞，當充分氧化后，重新插上電源繼續(xù)加熱3-5min，此時溶液變深紫色，拔去電源，直接將三角燒瓶插入預先備好的冰水里，放于暗處，第二天過濾后加入冰醋酸，即可使用三個月，但據(jù)我們的實踐及多年的經(jīng)驗認為，只要掌握好切片的“無水化”，該染液可反復使用達一年之久（天天使用）。 注意事項：
2．Mayer蘇木素（1903）
該試劑有的單位用作常規(guī)切片的染色，用它染核不會過染，時間可在20min至30min，核染色質(zhì)清晰可見，核呈灰黑色，可用作特殊染色核的對比染色試劑。如果先用天青石藍為媒染劑，染色時間可在2-3分鐘完成。 配制溶液時，先將蒸餾水稍加溫，加入蘇木素并不停攪拌直至完全溶解，繼而加入硫酸鋁鉀，令其充分溶解后，加入檸檬酸和水合氯醛，繼續(xù)攪拌均勻，全部溶解后再加入碘酸鈉，攪拌均勻，此時溶液的顏色變?yōu)樯钭厣^濾后即可使用。 3．Ehrlich氏蘇木素（1886）
將蘇木素溶于無水酒精里，硫酸鋁鉀溶于蒸餾水中，然后所有的試劑都加在一起，充分攪拌均勻后，放于窗臺上陽光充足的地，讓其慢慢氧化成熟，大約需四個星期，才可使用。該液 量種很好的細胞核染色液，用它染后，細胞核染色清晰，不易過染。對于用酸脫鈣組織細胞核的染色，該試劑優(yōu)于其它各種蘇木素。這種自然氧化成熟的蘇木素，可長期使用，不會變質(zhì)。但染色時間較長，需要20分鐘以上。 如需急用而蘇木素又未成熟時，該液可加入20-30mg的碘酸鈉，以促使其迅速氧化成熟，但這試劑配成后，就不是原來的蘇木素，不能長期使用，但起碼可用半年左右。 4．Carazzi氏蘇木素（1911）
將蘇木素溶于甘油，硫酸鋁鉀溶于300ml的蒸餾水中攪拌至完全溶解后，混合兩液，將碘化鉀溶于剩余的100ml蒸餾水中，加溫到溶解后，混合于上述的混合液中，攪拌均勻，過濾后即可使用，染色時間10min左右，配成后的液體可保存半年左右。 5．Cole氏蘇木素（1943）
將蘇木素溶于加溫的蒸餾水中，然后加入碘酒溶液，繼而加入飽和硫酸鋁鉀溶液，混和均勻后加熱，直至沸騰，將瓶子插入預備的冰水中，如同配制Hari氏蘇木素一樣，第二天過濾，即可使用，染色時間為20min以上。 （2）鐵蘇木素 1．Weigert氏鐵蘇木素 A液： 蘇木素 1g 無水酒精 100ml 將蘇木素溶于酒精，讓其慢慢氧化成熟，約四周以后，便可以使用，或者用成熟的10%的蘇木素酒精配制，即時可用。 B液： 29%三氯化鐵水溶液 4ml 蒸餾水 95ml 鹽酸 1ml 臨用時，取A液和B液等份混合，即可使用，在4小時內(nèi)使用完畢，如果超時，這種試劑便過分氧化而失效。因此，每次使用，需要多少配制多少，采取一次性用完，以免造成浪費。該染液具有抗弱酸的能力，因此，常用于某些特殊染色核的染色，染色時間為20-30分鐘。 2．Heidenhain氏鐵蘇木素（1896） A液： 蘇木素 0.5g 無水酒精 10ml 蒸餾水 90ml 將蘇木素溶于無水酒精，然后再加入蒸餾水，放置四周后便可成熟。 B液： 硫酸鐵銨 5g 蒸餾水 100ml 這種鐵蘇木素可以顯示多種物質(zhì)如：橫紋肌、髓鞘、線粒體、細胞核等，可被染為深灰色至黑色。 （3）鎢蘇木素 磷鎢酸蘇木素（PTAH） 蘇木素 0.5g 磷鎢酸 5g 蒸餾水 500ml 取300ml蒸餾水來溶解蘇木素，其余的蒸餾水溶解磷鎢酸，然后兩者混合在一起，攪拌均勻后放于亮處，約四周左右才可成熟使用。 該試劑可以顯示多種物質(zhì)，如：橫紋肌、神經(jīng)膠質(zhì)細胞、纖維、纖維素、髓鞘、膠厚，和細胞漿等，染色時間24小時以上。這種試劑配成后，可連續(xù)使用達數(shù)年時間。 （4）鉬蘇木素 磷鉬酸蘇木素（Thomas, 1941）
將B液過濾，取濾液50ml加到A液中去，充分混合后，可見該試劑為深紫色，放置24小時后，才可使用。染色時間2分鐘。它可顯示的物質(zhì)為：膠原及粗的網(wǎng)狀纖維；親銀細胞；核、Daneth氏細胞等。 （5）鉛蘇木素（Solcia等，1969） 硝酸鉛蘇木素 A液： 1.5克蘇木素溶于10ml 95%酒精中，取 1.5ml 硝酸鉛貯存液 10ml 蒸餾水 10ml 混合上述液體，攪拌均勻后，靜置30分鐘后過濾。 B液： 5%硝酸鉛水溶液 50ml 飽和醋酸銨水溶液 50ml 混合兩液，過濾，再加入甲醛2ml。 將A和B液混合，反復攪拌后放置30分鐘，過濾后可使用。染色時間37℃ 2-3小時，45℃ 1-2小時。 該試劑可將內(nèi)分泌顆粒和APUD細胞顆粒顯示出來，同時也可把肌肉和神經(jīng)等顯示出來。 二、伊紅染液的配制 在普通染色法中，有了細胞核的染色還不夠，還不能完整地顯示整個細胞來，只有同時將細胞漿顯示出來，細胞才完整。因此伊紅的染色也與蘇木素同等重要，就如同人的左右臂，缺一不可。 配制伊紅，有許多種方法，根據(jù)各單位的情況，使用不同種類的伊紅。 市售的伊紅有兩種：一是水溶性伊紅，二是醇溶性伊紅，在我們的實踐中，水溶性伊紅用低濃度的酒精來配制，只要配制得當，其效果非常好。 伊紅 1g 70-75%酒精 100ml 先將伊紅用蒸餾水(少許)調(diào)成漿糊狀，再加入酒精，邊加邊攪拌，直到徹底溶解，此時試劑有些混濁，取少許冰醋酸，加入到試劑中去，試劑逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榍辶?，呈鮮紅色，染出切片，效果很好。 深圳鵬一醫(yī)療儀器有限公司整理發(fā)布 深圳市鵬一醫(yī)療儀器有限公司專注液基制片，液基細胞染色設(shè)備及耗材研制，為『液基細胞、液基技術(shù)』專業(yè)服務商，欲了解更多公司液基產(chǎn)品細節(jié)及相關(guān)報價可點擊鵬一官方網(wǎng)站http://www.szpym.com，也可以直接撥打咨詢熱線4000755996或13926110601，相關(guān)人員會詳細解答!！
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